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Comment faire pousser des bactéries à partir du sol

Un certain nombre de méthodes existent pour étudier des communautés microbiennes du sol. Une technique consiste à cultiver un large spectre de bactéries vivant dans le sol. Pour ce faire, un milieu qui favorise la croissance d'un grand nombre d'espèces bactériennes (appelée "non sélectifs") Est requis. Un choix populaire est la gélose nutritive, qui est disponible dans le commerce ou peut être créé à partir de l'extrait de boeuf, de la peptone et l'agar. Des dilutions en série sont souvent faites des échantillons de sol pour créer des colonies gérables de la culture afin de faciliter davantage la recherche.


Sommaire

  • Prélèvement d'échantillons
  • Préparation des dilutions
  • La culture
  • Conseils & avertissements

    • Choses que vous devez

    • Des dispositifs stériles d'échantillonnage (seringues modifiés, carottiers, etc.)
    • Sol
    • Des boîtes de Pétri
    • Tubes à essai
    • 250 millilitres de ballon
    • Une solution saline de tampon phosphate
    • Gélose nutritive



    • Pipettes stériles

    1. Prélèvement d'échantillons

      • 1

        Déterminer la procédure d'échantillonnage des sols, y compris la taille de l'échantillon, l'emplacement (verticale et horizontale) et la fréquence des échantillons doivent être prises. Une procédure d'échantillonnage du sol très simple pourrait être un simple, 2 millilitres échantillon de sol de surface pris dans un pâturage sur un jour particulier.

      • 2

        Recueillir les échantillons de sol souhaités, assurant aucune contamination des échantillons. Une seringue jetable en plastique peut être modifié en un outil d'échantillonnage excellente en enlevant la pointe et la stérilisation de la seringue. Un avantage supplémentaire de ce dispositif est la facilité avec laquelle la taille des échantillons peuvent être mesurés volumétrique.

      • 3




        Stocker les échantillons à la température ambiante jusqu'au moment de les cultiver. Les échantillons doivent être cultivées dans les 72 heures suivant le prélèvement.

        • Préparation des dilutions

        • 1

          Ajouter un gramme d'échantillon de sol à 99 millilitres de tampon phosphate salin (PBS). Cela va créer une dilution au 1/100 de l'échantillon du sol, et le récipient doit être étiqueté de manière appropriée.

        • 2

          Mélanger ou agiter vigoureusement la solution pendant au moins une minute. L'intention de l'agitation est de suspendre les organismes dans la solution.

        • 3

          Laisser la question de particules de sol pour régler jusqu'à 15 minutes. Décanter la partie liquide dans des tubes à essai marqués à l'échantillon et la dilution appropriée (1/100).

        • 4



          Transférer un millilitre de la dilution 1/100 dans un tube à essai contenant 9 ml de PBS en utilisant une pipette stérile. Cela va créer une dilution 1/1000 de l'échantillon. Agiter le tube à essai jusqu'à ce que l'échantillon est bien mélangé, et de veiller à l'échantillon est étiqueté avec l'échantillon et une dilution appropriée.

        • 5

          Transférer un millilitre de la dilution 1/1000 dans un tube à essai contenant 9 ml de PBS en utilisant une pipette stérile. Ceci créera une dilution 1 / 10.000 de l'échantillon. Agiter le tube à essai jusqu'à ce que l'échantillon est bien mélangé, et de veiller à l'échantillon est étiqueté avec l'échantillon et une dilution appropriée. Dilutions supplémentaires peuvent être créés selon les besoins en répétant le processus dans les étapes 4 et 5.

        La culture

        • 1

          Préparer les boîtes de Pétri pour culture de coulée chauffé (45 ° C) sur gélose nutritive des boîtes de Pétri stériles jusqu'à ce que le fond de la plaque est recouverte. Ajouter un millilitre de la dilution 1/100 de la plaque.

        • 2

          Remuer doucement la gélose sur le fond de la plaque comme il se refroidit. Étiqueter la plaque avec l'échantillon correspondant et la dilution (1/100).

        • 3

          Répétez les étapes 1 et 2 pour chaque échantillon et la dilution, assurant la plaque est correctement étiquetés.

        • 4

          Couvrir les plaques et les inverser une fois que la gélose est solidifiée sur la partie inférieure de la plaque. Laisser les plaques pour définir pendant deux jours à température ambiante.

        • 5

          Examiner les plaques et d'effectuer une analyse supplémentaire.

      Conseils & Avertissements

      • Les écarts dans les méthodes d'échantillonnage, la solution de dilution et les milieux de culture peuvent être nécessaires dans certaines situations et à la culture des bactéries plus exigeants.
      • Cette méthode peut faciliter la croissance de nombreux champignons du sol ainsi que les bactéries.

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