Quantifier votre échantillon d'ARN par mesure de son absorption de la lumière ultraviolette (UV). Un spectrophotomètre nano-goutte utiliser seulement un ou deux microlitres de votre échantillon, que vous pouvez récupérer. Autres spectrophotomètres exigent un échantillon beaucoup plus large. Le coefficient d'extinction de nucleotides à une longueur d'onde d'UV de 260 nm dans un trajet de lumière de 1 cm est de 20. Sur la base de ce coefficient d'extinction, l'absorbance de 40µ-g / ml d'ARN dans les mêmes conditions est une. En utilisant cette information, vous pouvez calculer la concentration de votre échantillon d'ARN.
Faire une dilution, si nécessaire, de votre échantillon. Une dilution standard pour une microcuvette est de 1:40. Faire de cette dilution en ajoutant 2µ-ARN échantillon L à 78µ-L de l'eau stérile.
Suivez les protocoles de votre spectrophotomètre notamment pour calibrer la machine en utilisant un vide, puis déterminer la densité optique de votre échantillon à une longueur d'onde de 260 nm UV.
Multipliez l'absorbance de l'échantillon par votre facteur de dilution de 40&mu-ARN g / mL. L'équation serait: "concentration de l'ARN (µ-g / ml) = (DO260) x (facteur de dilution) x (40µ-ARN g / ml) / (DO260 une unité)" (Hofstra.edu) Par exemple: Si vous diluée votre échantillon par 1:40 et votre lecture de l'absorbance était de 0,08, vous multipliez 0,08 x 40 x 40 = 128 µ-g / ml = 0,13 µ-g /&mu-L
Figure sur la pureté de l'échantillon en prenant une autre lecture de l'absorbance à la longueur d'onde 280 nm UV. Le ratio DO 260 / DO 280 indiquera si - et à quel niveau - votre échantillon est contaminé avec des protéines ou du phénol. Un résultat de 1,8 à 2,0 indique l'ARN de qualité.