Comment mesurer la croissance bactérienne dans des boîtes de Pétri

Les bactéries sont cultivées dans des boîtes de Pétri sur un milieu solide connu sous le nom agar bactérienne, où soulevé, colonies circulaires forment. Leur croissance peut être mesurée par la simple observation de la façon dont leurs colonies sont denses et combien sont présents, mais des méthodes plus quantitatives comprennent l'utilisation d'une chambre de comptage, ou plus fréquemment, décomptes de plaques viables. Ce dernier est utilisé le plus souvent comme il fournit également des informations qualitatives telles que l'effet de conditions de croissance variables.


Sommaire

  • Instructions
  • Choses que vous devez

    • médias de dilution
    • Pipettes et conseils



    • Tubes




    • Milieux de culture bactérienne et des plaques d'agar
    • Vortex



    • Bec Bunsen
    • Épandeurs verre
    • 70 pour cent d'éthanol

    Instructions

    1. Mettre en place une série de tubes contenant de série des dilutions 1:10 de médias. Par exemple, mettre en place une rangée de 10 tubes et ajouter 10 microlitres de la culture bactérienne à partir de 90 microlitres de milieu de dilution. Fermez le couvercle du tube hermétiquement et vortex doucement pour obtenir un mélange homogène. Transférer 10 pl de ce côté au tube contenant 90 microlitres de milieu de dilution, et ainsi de suite. Assurez chaque tube est marqué par la bonne dilution, soit 10 ^ 1, 10 ^ 2, etc.

    2. Distribuer 10 microlitres de la dernière dilution (pour faire un facteur de placage de 10) sur la plaque de gélose. Utilisation de l'arête d'étalement, distribuer la solution bactérienne à travers la surface entière de la plaque de gélose. Répétez cette opération pour autant de répétitions que nécessaire, mais les doublons sont généralement suffisant. Remettre le couvercle et laissez les plaques d'agar sécher pendant plusieurs minutes soit sur un banc de laboratoire sous une flamme ou dans un incubateur. Inversez les plaques sur leurs couvercles, et étiqueter les plaques. Placer les plaques dans l'incubateur qui devrait être réglé à la température appropriée pour la souche de bactéries. Laisser se développer pendant 12 à 16 heures.

    3. Colonies doivent être visibles après 16 heures, cependant, certaines modifications génétiques peuvent exiger plus (par exemple développement de la couleur). Lorsque les colonies sont observées, prendre les plaques et trouver ceux qui ont entre 30 et 300 colonies. L'utilisation d'un marqueur permanent, placer un point sur le fond de la boîte de Pétri (le côté avec l'agar-agar, le couvercle ne) où une colonie est visible à travers la gélose, et compter. Répétez jusqu'à ce que toutes les colonies sont marqués et comptés.

    4. Pour calculer la quantité de bactéries dans la culture de départ de cette expérience, en utilisant la formule:
      Nombre de colonies comptées x facteur de dilution (par exemple 10 ^ 7, 9 ou 10 ^ etc) x facteur de dilution de placage (par exemple 10) = Nombre d'unités formant des colonies (UFC) par ml de culture de départ.

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